Les XXIIe JTA
> Présentation
> Programme
> Comité scientifique
> Intervenants
> Contacter les JTA

En pratique
> S'inscrire
> Renseignements
> Hébergement
> Programme social
> Post-congrès

Les archives
> Andrologie
> Biologie
> Gynécologie
> Infertilité
> Médecine foetale
> Néonatologie
> Nutrition
> Obstétrique
> Pédiatrie
> Périnatalité
> Périnéologie
> Phlébologie
> Psychosomatique

Rechercher

Titre: Nouveautés 2004 en biologie de la reproduction
Année: 2004
Auteurs:
Spécialité: Infertilité
Theme: hormone antiműllerienne

Nouveautés 2004
en biologie de la reproduction

P. COHEN-BACRIE, P. CLEMENT, A.M. JUNCA,
M. DUMONT, HASSAN, A. HAZOUT

Les nouveautés en biologie de la reproduction doivent répondre aux critères suivants : sélectionner dans le laboratoire les meilleurs ovocytes et les meilleurs spermatozoïdes ; évaluer de façon la plus fine possible le statut ovarien de la femme et dans certains cas tester la fragmentation de l'ADN des spermatozoïdes alors que rien ne laisse supposer une participation masculine à cette infertilité.

Nouvelle approche de l'hormone antimüllérienne

L'hormone anti mullérienne (AMH), est une glycoprotéine qui s'exprime dans le tissu testiculaire fśtal, elle est responsable de la différenciation des organes génitaux internes. Chez la femme l'AMH est spécifiquement produite par les cellules de la granulosa et plusieurs études ont démontré une corrélation entre sa synthèse et le développement folliculaire au cours d'un cycle. Les concentrations sériques d'AMH chez les femmes traitées en AMP pourraient représenter un facteur prédictif du succès d'une tentative d'AMP.

Matériels et méthodes

Lors d'un protocole de stimulation ovarienne (associant un agoniste de la GnRh et une FSH recombinante) en vue d'une tentative d'AMP nous avons évalué parmi 397 patientes (âge moyen 34.2 ans) à J3 les concentrations sériques d'AMH, de FSH, de LH, d'oestradiol (OE2) et d'inhibine B (INHB). Le nombre d'ovocytes en métaphase II, l'aspiration du liquide folliculaire et le nombre d'embryons obtenus à J2 ont été déterminés deux jours après la tentative. Le nombre d'embryons transférés et le nombre d'embryons congelés ont été évalués.

Les concentrations sériques d'AMH ont été déterminées par une technique immuno enzymatique ELISA utilisant un immunosorbant spécifique (Beckman, France) avec un seuil de sensibilité à 0.3 pmol/ml.

Les concentrations sériques d'INHB étaient déterminées par une technique imuno enzymatique ELISA utilisant un double anticorps (Serotec, France) avec une sensibilité de 15 pg/mL et des coefficients de variation intra essais <9 % et inter essai de 5 %.

Les concentrations sériques de FSH étaient déterminées par chemiluminescence (ACS-180, Bayer Diagnostics, France) avec des coefficients de variation intra essai ‹8 % et inter essai ‹7 %, et une standardisation avec le standard international 2 défini par l'OMS. Une analyse statistique était réalisée pour corréler les concentrations sériques de chaque hormone, le nombre d'ovocytes ponctionnés et le nombre d'embryons avec l'issue de la tentative d'AMP (grossesse évolutive ou non).

Les concentrations d'OE2 étaient déterminées par chemiluminescence directe, (ACS-180, Bayer Diagnostics, France) avec étalonnage contrôlé par chromatographie en phase gazeuse et spectrophotométrie de masse, seuil de détection à 15 pg/ml.

Les concentrations de LH étaient déterminées par chemiluminescence (ACS-180, Bayer Diagnostics, France) avec des coefficients de variation intra essai ‹8 % et inter essai ‹7 %, et une standardisation avec le standard international 2 défini par l'OMS.

Une analyse statistique était réalisée pour corréler les concentrations sériques de chaque hormone, le nombre d'cvocytes ponctionnés et le nombre d'embryons obtenus transférés et congelés avec l'issue de la tentative d'AMP (grossesse évolutive ou non).

Résultats

Les concentrations sériques d'AMH dans les deux groupes de patientes (grossesse évolutive : 140 patientes, ou absence de grossesse : 257 patientes) étaient respectivement 2,70_+1,.2 ngl/mL et 1,52+_1,3 ng/mL (p‹0.0001), par ailleurs les concentrations sériques d'INHB étaient respectivement 72,26+_33 pg/mL et 69,26+_32.2 pg/mL (p‹0.02), et les concentrations sériques de FSH étaient 6.46+_2.5 IU/mL et 6,72+_2.4 IU/mL (p‹0.03).

Les différences du nombre d'ovocytes et du nombre d'embryons entre les deux groupes de patientes sont résumées sur les 2 tableaux ci dessous .

Il n'y a pas de variations significatives dans les taux d'estradiol, de LH , et le nombre d'ovocytes et d'embryons congelés les entre les groupes enceintes et non enceintes.Le coefficient de corrélation de Spearman montre que l'AMH est étroitement corrélée au nombre d'ovocytes en métaphase II et au nombre d'embryons.

Dans une étude présentée à l'ESHRE de Madrid en 2003 la méthode de :
« Categorical regression with optimal scaling » avait montré une valeur seuil de 1,08 pg/ml au dessous de laquelle aucune grossesse n'était observée.

Discussion

Chez la femme, Themmen et al ( 2002) ont montré que les taux d'AMH étaient corrélés avec la réserve folliculaire qui détermine le taux de succès lors des tentatives d'AMP. Dans leur première étude chez des femmes volontaires ces auteurs ont montré que les taux sériques d'AMH diminuaient dans le temps, et qu'il existait une étroite corrélation entre ce taux et le nombre de follicules déterminés lors d'échographie transvaginale. Dans une seconde étude chez des patientes en protocole de stimulation ovarienne pour AMP, ils ont observé une bonne corrélation entre les taux sériques d'AMH et le nombre d'ovocytes ponctionnés et le succès de la tentative d'AMP.

Dans une étude longitudinale parmi 41 femmes en pré ménopause normoovulantes et 13 femmes ménopausées, De Vet et al. (2002) ont observé que les taux d'AMH diminuaient significativement au cours du temps (p<0.001). Les concentrations d'AMH variaient de 2.1 ng/mL (écart 0.1-7.4 ng/mL) à 1.3 ng/mL (écart 0.0 - 5.0 ng/mL) entre les deux dosages successifs chez les femmes en pré ménopause contrairement aux autres marqueurs de l'ovulation (FSH, inhibine B, estradiol). Les concentrations d'AMH sont corrélées avec le nombre de follicules antraux détectés à l'échographie et l'âge de la patiente, mais pas avec les taux de FSH ou d'inhibine B. Pour ces auteurs le dosage d'AMH représenterait un marqueur prédictif de l'âge ovarien.

Dans une étude rétrospective sur des sérums congelés provenant de femmes ayant eu une tentative d'AMP, Seifer et al. (2002) ont montré l'intérêt des dosages d'AMH au troisième jour du cycle. Les 28 femmes ayant moins de 6 ovocytes ponctionnés présentaient des concentrations sériques d'AMH de 1.0+/- 0.4 ng/mL. En comparaison les taux d'AMH chez les 79 patientes ayant plus de 11 ovocytes ponctionnés étaient 2 à 2.5 fois plus élevés (2.5 +/- 0.3 ng/mL). Ces données préliminaires montrent la relation possible entre le taux d'AMH au 3ème jour et le nombre d'ovocytes ponctionnés, et un taux élevé d'AMH est corrélé au nombre d'ovocytes ponctionnés.

Dans une étude récente présentée au dernier congrès de l'ASRM en octobre 2002 à Seattle, Fanchin et al. ont montré qu'un taux d'AMH au troisième jour du cycle était mieux corrélé avec le nombre de follicules antraux que les taux d'inhibine B ou de la FSH.

Les résultats analogues de notre étude montrent que les concentrations sériques d'AMH semblent représenter un facteur de prédictivité de l'issue d'une tentative d'AMP associées à l'âge et aux autres marqueurs hormonaux. Il reste à confirmer cependant les valeurs limites de ce facteur prédictif s'il est utilisé comme élément de screening avant une assistance médicale à la procréation.

Etude de la fragmentation de l'ADN
des spermatozoïdes

Origine de la fragmentation de l'ADN spermatique

La formation des spermatozoïdes matures nécessite une suite de mitose et de méiose, une modification de l'architecture spermatique, et un remplacement des histones du noyau par des protamines permettant un haut niveau de condensation de celui ci.

Les cassures de l'ADN se produisent d'une part au moment des méioses et des mitoses nécessitant la mise en place de chiasma avec échanges au niveau des chromosomes homologues (crossing over) et d'autre part au moment de la protamination (remplacement des histones par les protamines) qui entraîne une forte modification de la structure tertiaire de l'ADN avec hyper condensation de celui ci (Balhorn et al, 1982).

Ces deux phénomènes font intervenir des enzymes de réparations de l'ADN (les isomérases).

o Série complexe de modification de l'ADN spermatique avec remplacement des histones par les protamines (Kramer and Krawetz 1997 Mol Hum Reprod 3:473-478)

Causes des augmentations pathologiques de la fragmentation
de l'ADN des spermatozoïdes matures

Deux théories ont été proposées pour expliquer ces anomalies du DNA dans les spermatozoïdes humains éjaculés.

La première théorie vient de l'étude d'animaux modèles et de la manière unique avec laquelle la chromatine des spermatozoïdes des mammifères est condensée.

Des cassures endogènes du DNA ont été montrées chez la souris à des stades précis de la spermiogenèse, et ont une signification fonctionnelle (Mc Pherson et Longo, 1992, 1993; Sakkas, 1995).

Un défaut de fonctionnement des isomérases (enzymes de réparation) entraîne des problèmes au niveau de la protamination avec possibilité de fragmentation de l'ADN. Cette hypothèse est supportée par le fait que la présence d'altération de l'ADN est corrélé avec une faible compaction de la chromatine liée à une insuffisance de protamination (Manicardi et al, 1995; Sailer et al, 1995).

La seconde théorie fait intervenir le phénomène d'apoptose. Ce phénomène physiologique permet de réguler la prolifération clonale expansive des spermatogonies, et de la limiter pour maintenir un équilibre entre les cellules de la lignée germinale et les cellules de Sertoli. La présence de cassures endogènes dans l'ADN des spermatozoïdes éjaculés pourrait être liée à un phénomène d'apoptose permettant d'éliminer la présence de cellules anormales du pool génétique (Gorczyca et al, 1993)

La protéine Fas, récepteur de surface de la cellule germinale, est certainement impliquée dans la régulation apoptotique (Lee et al, 1997). Chez la souris, les cellules de Sertoli expriment le récepteur FasL et entraînent la mort des cellules germinales qui expriment Fas en surface, limitant ainsi la population de cellules germinales que les cellules de Sertoli peuvent supporter, créant ainsi un équilibre entre les deux types de cellules (Lee et al, 1997; Rodriguez et al, 1997).

Dans certains cas pathologiques, les spermatozoïdes échappent au phénomène d'apoptose, et on observe alors une présence plus importante de spermatozoïdes éjaculés présentant un ADN fragmenté.

L'augmentation de la fragmentation de l'ADN spermatique peut également être liée à la présence de radicaux oxygénés liés à un phénomène inflammatoire et/ou infectieux.

Techniques d'études de la fragmentation de l'ADN spermatique

Différentes techniques peuvent être utilisées pour la mise en évidence de la fragmentation de l'ADN spermatique :

• Comet : Electrophoresis + Fluorescent dye

• Tunel : UTP binding + Flow cytometry

• NT : Nick translation biotinylated UTP

• AO : Acridine orange + microscopy

• SCSA : Acridine Orange + Flow cytometry.

Conséquences de la fragmentation de l'ADN spermatique sur la fertilité

Différentes études ont décrit le pourcentage de spermatozoïdes possédant une cassure endogène du DNA dans l'éjaculat, et ont montré une corrélation avec une diminution de la fertilité (Bianchi et al, 1993; Sakkas et al, 1996).

Sur une cohorte de 298 patients, l'étude de la fragmentation de l'ADN par la technique TUNEL a montré une corrélation négative entre le % de fragmentation de l'ADN spermatique, et la mobilité, la morphologie, et la concentration des spermatozoïdes éjaculés. Sur 143 patients de FIV, la même équipe montre une corrélation négative entre le pourcentage de fragmentation de l'ADN spermatique et le taux de fécondation et de clivage embryonnaire (Sun et al, 1997).

D'autres études ne montrent pas de corrélation entre le pourcentage de fragmentation de l'ADN spermatique avec la mobilité, ou la morphologie des spermatozoïdes, mais montre l'existence une corrélation positive entre ce pourcentage de fragmentation et la numération des spermatozoïdes (Evenson D et al, 1999).

Différentes équipes montrent également une corrélation positive entre le pourcentage élevé de fragmentation de l'ADN spermatique et la diminution du taux de fécondation en ICSI (Sakkas et al, 1996 ; Lopes et al, 2002), la diminution du taux de clivage embryonnaire (Lopes et al, 2002), la diminution du taux d'obtention de blastocystes (Evenson DP, et al, 1999), et la diminution du taux de grossesses évolutives (Evenson DP et al, 1999).

Bien que Aravidan et al (1997) établisse une corrélation entre les différentes techniques (COMET assay, TUNEL assay, SCSA), il semble que le seuil prédictif, des différents éléments notés ci dessus, du pourcentage de fragmentation soit différents en fonction de la technique utilisée.

Ainsi Evenson DP, avec la technique SCSA, montre une chute importante du taux d'obtention de blastocyste et de grossesse évolutive quand le pourcentage de fragmentation est supérieur à 30 %. Sur une grande série de patients, il n'obtient aucune grossesse évolutive si le pourcentage de fragmentation de l'ADN spermatique est supérieur à 30 %.

Sur une série de 131 patients en ICSI, Lopes et al (2002) obtiennent une chute des taux de fécondation quand le taux de fragmentation de l'ADN spermatique est supérieur à 25 % (évaluation par la technique TUNEL).

Sur une série de 154 cycles d'insémination intra utérine, Duran E.H. et al (2002) n'obtiennent aucune grossesse évolutive quand le pourcentage de fragmentation de l'ADN spermatique est supérieur à 12 %.

Ces différentes données montrent qu'il faut rester encore prudent dans l'interprétation des résultats obtenus. Il serait souhaitable de compléter ces études d'une part avec des évaluations utilisant en parallèle différentes techniques de manière à comparer les seuils prédictifs de chacune, et d'autre part en faisant une évaluation de ces techniques sur une série de spermes venant d'hommes fertiles (donneurs).

Ces différentes données nécessitent également d'autres études pour mieux connaître les causes des altérations de l'ADN spermatique, et pour développer éventuellement des méthodes de sélection des spermatozoïdes indemnes d'altération afin de pourvoir les utiliser en assistance médicale à la procréation.

Evaluation fine des ovocytes

L'aspect des ovocytes et des dysmorphies ovocytaires cytoplasmiques ont été décrites par Van Blerkom et Coll (Hum.Reprod, 1992).

En microscopie optique les ovocytes normaux montrent un cytoplasme clair, homogène, à texture uniforme, un espace périvitellin propre et de taille normale, un 1er globule polaire non fragmenté.

Les dysmorphies ovocytaires portent :

1 - sur la forme, la taille et la couleur des ovocytes,

2 - la granularité et l'homogénéité du cytoplasme ovocytaire,

3 - la zone corticale quand elle est dépourvue d'organites cytoplasmiques,

4 - la présence de vacuoles plus ou moins importantes, d'inclusions cytoplasmiques, de corps réfractiles, de zones nécrotiques ou d 'accumulation de réticulum endoplasmique lisse,

5 - la taille de l'espace périvitellin et la présence de débris dans cet espace,

6 - les anomalies du 1er globule polaire (par exemple une fragmentation) et de la zone pellucide (par exemple l'épaisseur).

Dans notre expérience et malgré une bibliographie contradictoire cette morphologie est très utile pour définir la qualité ovocytaire.

Evaluation fine des spermatozoïdes

La pratique de l'ICSI et sa capacité à produire des embryons et des grossesses avec des spermes très altérés nous a fait croire , au début, que tous les couples confrontés à la stérilité masculine allaient pouvoir être les parents biologiques de leur enfant. Puis, très vite, on s'estt aperçu que des anomalies très grossières portant sur la majorité des têtes des spermatozoïdes, telles que la macrocéphalie ou la globozoospermie ne donnaient pas ou peu de grossesses lorsque des embryons pouvaient être obtenus.

Bien que plusieurs auteurs n'aient pas noté de relation entre le pourcentage de formes typiques et les résultats de l'ICSI, le taux de succès semble néanmoins dépendre de l'aspect morphologique du spermatozoïde injecté. De Vos et coll., 2003, ont publié une analyse rétrospective concernant l'influence de la morphologie du spermatozoïde injecté sur le taux de fécondation, la morphologie embryonnaire et les taux de grossesses en ICSI. Un spermatozoïde, observé au grossissement 400x, était considéré normal si la tête était normale (forme, taille et acrosome) et s'il n'y avait ni défaut du flagelle ni de la pièce intermédiaire. Hormis les anomalies grossières de la tête des spermatozoïdes, les défauts les plus évidents pouvant être observés étaient :têtes allongées (2 fois moins large que la normale), têtes amorphes, têtes au « cou cassé »(l'axe de la tête dévie de 30° par rapport à l'axe de la pièce intermédiaire), les gouttelettes cytoplasmiques. Tous les patients avaient des ovocytes matures et normaux au moment de l'ICSI. Sur 1667 cycles et 1393 transferts d'embryons ils ont constaté une baisse du taux de fécondation avec l'injection de spermatozoïdes anormaux : 60,7 % contre 71,7 % pour les spermatozoïdes normaux et cela, quelle que soit l'origine des spermatozoïdes utilisés (éjaculât, épididyme, testicule). Alors qu'il n'a été observé aucune différence dans la morphologie des embryons obtenus à J2 ou J3, les taux de grossesses et d'implantation étaient significativement plus élevés avec les spermatozoïdes normaux, soit : 36,7 % et 18,7 % contre 20,2 % et 9,6 % pour les anormaux. La présélection des spermatozoïdes sur leur morphologie est donc une étape cruciale de la procédure d'ICSI.

On sait que la structure et/ou la composition de la chromatine des noyaux des spermatozoïdes humains est très variable (même parmi les noyaux spermatiques de forme normale) et que des vacuoles nucléaires de taille et de localisation variables sont régulièrement observées en microscopie électronique à transmission (Bedford et coll.,1973). La chromatine granuleuse peu condensée retrouvée dans les spermatozoïdes, ressemble à celle que l'on trouve dans les spermatides allongées des autres espèces de mammifères, ce qui traduirait une immaturité nucléaire. En assistance médicale à la procréation, certains échecs d'implantation et de grossesse évolutive pourraient être du à des altérations de la chromatine. C'est pourquoi, Evenson et coll., 2002, préconise de faire une évaluation de l'intégrité de la chromatine, en mesurant le taux de fragmentation de l'ADN des spermatozoïdes. Ce test, appelé SCSA pour Sperm Chromatin Structure Assay, pourrait être utilisé dans les stérilités dites inexpliquées et/ou les échecs répétés d'implantation à condition d'avoir au moins 1 millions de spermatozoïdes par ml. Ce test ne peut donc pas être utilisé pour les OAT sévères avec lesquelles nous pouvons avoir des échecs répétés d'implantation après ICSI.

Dans le but également , de voir si des anomalies fines de la morphologie pouvaient interférer avec les résultats de l'ICSI, Bartoov et coll., 2002, ont mis au point un microscope haute résolution permettant d'observer les spermatozoïdes à un grossissement de 6600x. La technique, appelée MSOME (pour Motile Sperm Organellar Morphology Examination), consiste à noter tous les détails morphologiques (décrits en fonction d'observations préalables faites en microscopie électronique à transmission et à balayage) des spermatozoïdes mobiles en temps réel. L'observation porte sur 6 parties du spermatozoïde : acrosome, lamina post-acrosomique, cou, mitochondries, flagelle, noyau. Pour le noyau, forme et taille sont notées et l'on porte une grande attention à l'aspect de la chromatine : le nombre et la taille des vacuoles sont répertoriés. Un noyau est considéré normal s'il a une taille de 4,75 + 0,28μm sur 3,28 + 0,20μm, et si les vacuoles occupent moins de 4 % de la surface nucléaire. Sur une série de 100 patients pour lesquels l'ICSI a été réalisée de façon conventionnelle, les spermatozoïdes non utilisés ont été soumis au MSOME ( 100 spermatozoïdes observés pour chaque patient). L'analyse des résultats montre que seule le pourcentage de noyaux spermatiques normaux est corrélé au taux de fécondation et au taux de grossesse. Aucun des spermes contenant moins de 20 % de noyaux normaux n'a permis d'obtenir une grossesse.

L'application préalable en ICSI, de ce test , à 24 couples en échecs répétés de cycles de FIV et /ou ICSI (7,6+2,1 cycles), a permis à Bartoov et coll.,2001, d'obtenir 14 grossesses (G) sur 21 transferts (T) d'embryons, soit un taux de 58 % G/T.

Dans notre laboratoire, nous avons équipé un microscope inversé Olympus (IX70) avec un contraste de Nomarski. On utilise un objectif 100 à immersion, lequel, avec le sélecteur de grossissement (x1,5) nous donne un grossissement de 150x sur le microscope. L'image obtenu au microscope est récupérée par une caméra Sony vidéo couleur de telle sorte que le grossissement final sur la vidéo soit de 6600x. L'observation de spermes normaux, fécondant en FIV nous a permis de reconnaître des spermatozoïdes à tête normale. Puis nous avons déjà pu observer une très grande variabilité dans le nombre et la taille des vacuoles nucléaires des spermatozoïdes de patients d'ICSI. Le tri des spermatozoïdes par cette technique pourra être utilisé pour les patients en échecs répétés d'ICSI , pour ceux dont la tératozoospermie polymorphe portant sur les têtes sera élevée, pour les prélèvements testiculaires et peut être aussi pour les patients ayant peu d'ovocytes... Dans les cas où aucun spermatozoïde à tête « normale » ne pourra être sélectionné, elle permettra au couple de passer à l'IAD, à l'adoption ou à l'arrêt des techniques d'AMP.

Bibliographie

[1]   Nathalie Josso, Lucile Gouédard Biologie de l'hormone anti-müllérienne et de son récepteur Médecine thérapeutique Endocrinologie. Vol. 2, N° 2, Mars-Avril 2000 : 154-60

[2]   A Themmen, M Gruijters, A L Durlinger,JA Visser. Anti-mullerian hormon and ovarian developmenrt. First International Workshop on anti Mullerian hormone , Aix en Provence,October 2002

[3]   Seifer DB, MacLaughlin DT, Christian BP, Feng B, Shelden RM. Early follicular serum mullerian-inhibiting substance levels are associated with ovarian response during assisted reproductive technology cycles. Fertil. Steril. 2002 Mar; 77 (3):468-71.

[4]   de Vet A, Laven JS, de Jong FH, Themmen AP, Fauser BC. Antimullerian hormone serum levels : a putative marker for ovarian aging. Fertil Steril. 2002 Feb;77 (2]) 357-62.

[5]   Renato Fanchin, Joelle Taieb, Luca Maria Schonauer, Ghada Hosny, Carlo Torrisi, René Frydman : Serum müllerian-inhibiting substance is a reliable predictor of the ovarian follicular statusFertility and Sterility, 78:1001 : S33-S34

[6]   Fanchin R, Schonauer LM, Righini C, Frydman N, Frydman R, Taieb J.Serum anti-Mullerian hormone dynamics during controlled ovarian hyperstimulation. Hum Reprod. 2003 Feb;18 (2) 328-32.

[7]   Fanchin R, Schonauer LM, Righini C, Guibourdenche J, Frydman R, Taieb J.Serum anti-Mullerian hormone is more strongly related to ovarian follicular status than serum inhibin B, estradiol, FSH and LH on day 3. Hum Reprod. 2003 Feb;18 (2) 323-7.

[8]   Fanchin R, Schonauer LM, Righini C, Guibourdenche J, Frydman R, Taieb J. : Serum anti-Mullerian hormone is more strongly related to ovarian follicular status than serum inhibin B, estradiol, FSH and LH on day 3. Hum Reprod. 2003 Feb;18 (2) 323-7.

[9]   van Rooij IA, Broekmans FJ, te Velde ER, Fauser BC, Bancsi LF, de Jong FH, Themmen AP. Serum anti-Mullerian hormone levels: a novel measure of ovarian reserve.Hum Reprod. 2002 Dec;17 (12) 3065-71   

[10]   Durlinger AL, Visser JA, Themmen AP.Regulation of ovarian function: the role of anti-Mullerian hormone.Reproduction. 2002 Nov;124 (5) 601-9.

[11]   Durlinger AL, Gruijters MJ, Kramer P, Karels B, Ingraham HA, Nachtigal MW, Uilenbroek JT, Grootegoed JA, Themmen AP.Anti-Mullerian hormone inhibits initiation of primordial follicle growth in the mouse ovary. Endocrinology. 2002 Mar;143 (3]) 1076-84.

[12]   COHEN-BACRIE,TERNAUX F, JUNCA AM; HAZOUTA Anti-Müllerian hormone as a novel predictive factor of IVF outcome in women undergoing an ovarian stimulation ? ESHRE Madrid 2003

[13]   A HAZOUT AM JUNCA A LE MEUR F TERNAUX P COHEN-BACRIE SERUM ANTI MULLERIAN HORMONE AS A NOVEL PREDICTIVE FACTOR OF SUCCESS IN ART AMONG WOMEN WITH POLYCYSTIC OVARY SYNDROME ?ASRM San Antonio 2003.

[14]   DURAN E.H., MORSHEDI M., TAYLOR S., OEHNINGER S. Sperm DNA quality predicts intrautérine insemination outcome: a prospective cohort study. Hum Reprod, 2002, 17, 3122-3128.

[15]   LARSON K.L., DE JONGE C.J., BARNES A.M., JOST L.K., EVENSON D.P. Sperm chromatin structure assay parameters as predictors of failed pregrancy following assisted reproductive techniques. Hum Reprod, 2000, 15, 1717-1722.

[16]   LOPES S., SUN J.G., JURISICOVA A., MERIANO J., Casper R.F.: Sperm Deoxyribonucleic Acid Fragmentation is Increased in Poor-Quality Semen Samples and Correlates with Failed Fertilization in Intracytoplasmic Sperm Injection. Fertil Steril, 69, 528-532.

[17]   SAKKAS D., MARIETHOZ E., MANICARDI G., BIZZARO D., BIANCHI P.G., BIANCHI U. Origin of DNA damage in ejaculated human spermatozoa. Review of Reproduction, 1999, 4, 31-37.

[18]   TIEPOLO L., ZUFFARDI O. Localization of factors controlling spermatogenesis in the non-fluorescent portion of the human Y chromosome long arm. Hum. Genet., 1976, 34:119-124.

[19]   B. BARTOOV et al. Real-Time Fine Morphology of Motile Human Sperm Cells is Associated with IVF-ICSI Outcome. Journal of Andrology 2002,23:1-8.

[20]   B. BARTOOV et al. Selection of Spermatozoa with Normal Nuclei to Improve the Pregnancy Rate with Intracytoplasmic Sperm Injection. N Engl J Med 2001,14:1067-1068.

[21]   J.M.BEDFORD et al. Variations in the structural character and stability of the nuclear chromatin in morphologically normal human spermatozoa. J Reprod Fert 1973,33:19-29.

[22]   A. DE VOS et al. Influence of individual sperm morphology on fertilization, embryo morphology, and pregnancy outcome of intracytoplasmic sperm injection. Fertil Steril 2003,79:42-48.

[23]   D.P.EVENSON et al. Sperm Chromatin Structure Assay :Its Clinical Use for Detecting Sperm DNA Fragmentation in Male Infertility and Comparisons With Other Techniques. Journal of Andrology 2002,23:25-43.

   NOUVEAUTéS 2004 EN BIOLOGIE DE LA REPRODUCTION   255

256   P. COHEN-BACRI, P. CLéMENT, A.M. JUNCA, M. DUMONT, HASSAN, A. HAZOUT

Description de la population

Age   34,01

Cycles   397

Grossesses   140

AMH   1,94

INHB   70,29

E2   26,13

FSH   6,62

LHS   4,28

Rang tentative   2,26

Durée de stimulation   11,68

E2 déclenchement   21,38

LH déclenchement   2,38

PRG déclenchement   0,84

Ovocytes MII   7,74

Embryons J2   5,36

Embryons transférés   2,24

Embryons congelés   1,26

Description de la population

Données

˙Non enceintes

˙Enceintes

˙Total

˙Age

˙34,29

˙33,50

˙34,01

˙Nombre

˙257

˙140

˙397

˙AMH

˙1,52

˙2,70

˙1,94

˙INHB

˙69,26

˙72,18

˙70,29

˙E2

˙26,04

˙26,31

˙26,13

˙LHS

˙4,20

˙4,44

˙4,28

˙FSH

˙6,72

˙6,46

˙6,62

˙Rang tentative

˙2,32

˙2,14

˙2,26

˙Durée de stimulation

˙11,68

˙11,66

˙11,68

˙Ovocytes M II

˙7,71

˙7,79

˙7,74

˙Embryons j2

˙5,06

˙5,90

˙5,36

˙Embryons transférés

˙2,09

˙2,51

˙2,24

˙Embryons congelés

˙1,19

˙1,39

˙1,26

   NOUVEAUTéS 2004 EN BIOLOGIE DE LA REPRODUCTION   257

258   P. COHEN-BACRI, P. CLéMENT, A.M. JUNCA, M. DUMONT, HASSAN, A. HAZOUT

   NOUVEAUTéS 2004 EN BIOLOGIE DE LA REPRODUCTION   259

260   P. COHEN-BACRI, P. CLéMENT, A.M. JUNCA, M. DUMONT, HASSAN, A. HAZOUT

   NOUVEAUTéS 2004 EN BIOLOGIE DE LA REPRODUCTION   261

262   P. COHEN-BACRI, P. CLéMENT, A.M. JUNCA, M. DUMONT, HASSAN, A. HAZOUT

   NOUVEAUTéS 2004 EN BIOLOGIE DE LA REPRODUCTION   263

264   P. COHEN-BACRI, P. CLéMENT, A.M. JUNCA, M. DUMONT, HASSAN, A. HAZOUT

   NOUVEAUTéS 2004 EN BIOLOGIE DE LA REPRODUCTION   265

266   P. COHEN-BACRI, P. CLéMENT, A.M. JUNCA, M. DUMONT, HASSAN, A. HAZOUT

   NOUVEAUTéS 2004 EN BIOLOGIE DE LA REPRODUCTION   267